পণ্য

এনজাইমেটিক ক্রিয়াকলাপ পরিবর্তনের জন্য যুগপত মিউটেশনের প্রভাবগুলি যে পদ্ধতিতে একত্রিত হয় তা সহজেই অনুমান করা যায় না কারণ এই প্রভাবগুলি সর্বদা রৈখিক পদ্ধতিতে সংযোজক হয় না।তাই, অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশের যুগপত মিউটেশনের প্রভাবের বৈশিষ্ট্য যা সাবস্ট্রেটকে আবদ্ধ করে তা এনজাইমের সাবস্ট্রেটের নির্দিষ্টতা বোঝার ক্ষেত্রে গুরুত্বপূর্ণ অবদান রাখতে পারে।স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা (Sfbetagly) থেকে বিটা-গ্লাইকোসিডেসে, Q39 এবং E451 উভয় অবশিষ্টাংশই সাবস্ট্রেটের সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে এবং এটি সাবস্ট্রেটের নির্দিষ্টতা নির্ধারণের জন্য অপরিহার্য।Sfbetagly (A451E39, S451E39 এবং S451N39) এর ডাবল মিউট্যান্টগুলি সাইট-নির্দেশিত মিউটাজেনেসিস দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল, ব্যাকটেরিয়াতে প্রকাশ করা হয়েছিল এবং অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবহার করে শুদ্ধ করা হয়েছিল।এই এনজাইমগুলিকে সাবস্ট্রেট হিসাবে p-nitrophenyl beta-galactoside এবং p-nitrophenyl beta-fucoside ব্যবহার করে চিহ্নিত করা হয়েছিল।Q39 এবং E451 অবস্থানে সাইট-নির্দেশিত মিউটেশন ধারণকারী Sfbetagly-এর একক এবং ডাবল মিউট্যান্টের জন্য k cat/Km অনুপাত ব্যবহার করা হয়েছিল যে ডবল মিউটেশনের (Gdouble) ESdouble ড্যাগার (এনজাইম-ট্রানজিশন স্টেট কমপ্লেক্স) এর মুক্ত শক্তির উপর প্রভাব daggerxy) একক মিউটেশন (Gdouble daggerx এবং Gdouble daggery) থেকে প্রাপ্ত প্রভাবের সমষ্টি নয়।Gdouble ড্যাগারের এই পার্থক্য নির্দেশ করে যে একক মিউটেশনের প্রভাব আংশিকভাবে ওভারল্যাপ করে।তাই, এই সাধারণ প্রভাবটি Gdouble daggerxy-এ শুধুমাত্র একবার গণনা করা হয়।বিটা-গ্লাইকোসিডেসের ক্রিস্টালোগ্রাফিক ডেটা Q39 এবং E451 এবং সাবস্ট্রেটের একই হাইড্রোক্সিল গ্রুপের অবশিষ্টাংশ জড়িত একটি বিডেন্টেট হাইড্রোজেন বন্ডের উপস্থিতি প্রকাশ করে।অতএব, উভয় থার্মোডাইনামিক এবং ক্রিস্টালোগ্রাফিক ডেটা পরামর্শ দেয় যে Q39 এবং E451 অবশিষ্টাংশগুলি সাবস্ট্রেটের সাথে তাদের নিজ নিজ মিথস্ক্রিয়ায় পারস্পরিক প্রভাব প্রয়োগ করে।