পণ্য

কোলিসিন E1 চ্যানেল ডোমেনের মেমব্রেন টপোলজি ফ্লুরোসেন্স রেজোন্যান্স এনার্জি ট্রান্সফার (FRET) দ্বারা অধ্যয়ন করা হয়েছিল।FRET-তে দাতা হিসেবে জেনেটিক্যালি এনকোড করা ফ্লুরোসেন্ট অ্যামিনো অ্যাসিড (কুমারিন) এবং FRET গ্রহণকারী হিসেবে DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) এর সাথে একটি বেছে বেছে লেবেলযুক্ত সিস্টাইন অবশিষ্টাংশ জড়িত।ফ্লুরোসেন্ট কুমারিন অবশিষ্টাংশ একটি অর্থোগোনাল tRNA/aminoacyl-tRNA সিনথেটেস জোড়ার মাধ্যমে প্রোটিনের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল যা কলিসিন চ্যানেল ডোমেনের মধ্যে যেকোনো সাইটে নির্বাচনী অন্তর্ভুক্তির অনুমতি দেয়।প্রতিটি ভেরিয়েন্টে কুমারিন সংযোজনের জন্য একটি স্টপ (TAG) মিউটেশন এবং DABMI সংযুক্তির জন্য একটি সিস্টাইন (TGT) মিউটেশন রয়েছে।দ্রবণীয় এবং ঝিল্লি-আবদ্ধ উভয় অবস্থার জন্য FRET বিশ্লেষণ ব্যবহার করে হেলিস 1-6-এর মধ্যে ছয়টি আন্তঃহেলিকাল দূরত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল।FRET ডেটা চ্যানেল ডোমেনের মেমব্রেন-বাউন্ড কাঠামোতে নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে ঝিল্লি অ্যাসোসিয়েশনের উপর হেলিস 3-6-এর মধ্যে আন্তঃহেলিকাল দূরত্বের বড় পরিবর্তনগুলি দেখিয়েছে।সাধারণভাবে, coumarin-DABMI FRET আন্তঃহেলিকাল কার্যকারিতা ঝিল্লি বাঁধাইয়ের উপর হ্রাস পায়, যা কোলিসিন চ্যানেলের জন্য ছাতা মডেলের উপর তৈরি হয়।চ্যানেল ডোমেনের বন্ধ অবস্থার জন্য একটি অস্থায়ী মডেল বর্তমান এবং পূর্বে প্রকাশিত FRET ডেটার উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছিল।মডেলটি হেলিস 8 এবং 9 দ্বারা গঠিত কেন্দ্রীয় ট্রান্সমেমব্রেন হেয়ারপিনের চারপাশে হেলিস 1, 6, 7, এবং 10 এর বাইরের দিক থেকে ঘড়ির কাঁটার দিকে হেলিস 1-7 এর বৃত্তাকার বিন্যাসের পরামর্শ দেয় এবং ঝিল্লি ইন্টারফেসিয়াল অ্যাসোসিয়েশন।